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常規菌檢測的目的是一種指示菌,一般以CFU/ML來計量,比如總菌數和大腸菌群,這兩個一般是用來評價食品被污染的程度,因為按常理,我們生活當中接觸的致病菌還是相對較少的,而且人體本身也具有免疫功能,所以如果這兩個指示菌如果不超標的話,我們就有理由相信該食品是相對安全的,注意:不是絕對安全。
傳統的檢測方法也很簡單,一般就是培養富集后計數,其大致流程是這樣:
1)取樣,一般都是取25g樣品加入到225ml的生理鹽水中,取樣方法會根據樣品不同有所不同。比如肉制品,可以用剪刀剪碎。
2)均質,要保證均質的力度不能太大,如果太大有可能損害樣品中的微生物,有些檢驗人員可能就是用手捏一捏,甩一甩,也有用拍擊式均質器的。
3)稀釋,一般來說稀釋3個梯度,10倍,100倍,1000倍,而且每個稀釋梯度要倒兩個平板。
4)培養,把事先準備好的培養基(培養基的制備,一般要經過配比,高壓滅菌等過程,當然也有配制好的商業培養基,進口的有MERCK,國產的也很多,比如陸橋)倒平板,然后劃線培養或者涂抹均勻即可,只要保證盡量把含菌的稀釋液涂抹開,不要有菌落重疊的現象,然后放入恒溫培養箱的進行培養,培養溫度與所檢測微生物不同而不同,比如大腸菌群是37度,糞大腸菌群要略高一點。
5)計數,找一個比較容易計數的梯度進行計數,然后根據稀釋倍數反推出樣品中的微生物,計數說簡單點就是數菌落的數量,如果你涂抹夠開的話,每個培養前的微生物會長成一個菌落,所以個1個菌落就代表1個培養前的微生物。(說到這,我就想起我以前老是想,一個菌落是由很多個微生物組成的,光數菌落怎么會得出樣品中微生物的個數呢?這就是沒有考慮培養前與培養后的變化。
常規菌大概就是這樣啦,目前大多數檢驗單位都在使用這種傳統的培養方法,其優點就是便宜,廉價,但是比較慢,如今市面上有很多總菌數和大腸菌群的快速商業方法,比如3M,他們在紙片上提供現成的培養基,只需把稀釋液直接接種到培養基即可,相比較而言,節省了我們制備培養基的時間,不過貌似在培養時間上并沒有縮短。還有檢測培養基電導率方法來檢測的,因為培養前,培養基都是大分子物質,這些物質的電導率相對較低,經過微生物代謝后,被分解為小分子物質,所以電導率急劇增加,通過建一個曲線來反推微生物的個數。
致病菌的檢測是不得檢出的,所以要比常規菌要復雜,所耗時間更長,有可能還需要用沒有選擇性的培養基進行前增菌,然后再用選擇性培養基進行增菌,如果有可疑菌落再挑取利用生化反應進行鑒定。
比如沙門氏菌,檢測流程大致如下:
1)取樣,同常規菌
2)均質,同常規菌
3)前增菌,先要用無選擇性的培養基進行富集增菌,因為有可能樣品中所含的沙門氏菌受傷,或較少,直接用選擇性培養基培養的話,沙門氏菌不會生長,從而出現假陰性。
4)增菌,用選擇性的培養基進行培養,這樣大部分的微生物在選擇性的培養基上都不會生長,就如同過濾一樣,如果長菌,根據菌落形態學來判斷到底是否為可疑菌落,如果沒有可疑菌落,可以判定為陰性,如果有,挑取并做生化反應鑒定是否是真的沙門氏菌。
5)做生化反應進行鑒定,這里就不說了,我也不太清楚,就知道有這個流程。